無(wú)菌室是進(jìn)行細(xì)菌、酵母、霉菌以及各類(lèi)致病性微生物檢驗(yàn)的關(guān)鍵場(chǎng)所，其是否達(dá)到無(wú)菌操作要求，內(nèi)部質(zhì)量控制體系是否完善直接關(guān)系到食品微生物學(xué)檢驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性。

無(wú)菌室的整體布局

從總體布局上看，無(wú)菌室的墻壁、地面和天花板要求表面平整光滑、易于清洗，不易滲漏液體，并能抵抗常用消毒劑的腐蝕。無(wú)菌室一般要求要完全密閉，并保持好日常衛(wèi)生，以防止室外不凈氣體和部分昆蟲(chóng)進(jìn)入，與外界應(yīng)有完善的物流窗和高效空氣過(guò)濾除菌設(shè)備。

無(wú)菌室內(nèi)應(yīng)備有工作濃度的常用消毒液，如苯酚酸(堿)溶液，75％的酒精，0.1％的新潔爾滅溶液等等。

無(wú)菌室的位置一般要求建在人員流動(dòng)較少的地方，距離普通的辦公環(huán)境或者微生物準(zhǔn)備室要有一定的距離。無(wú)菌室內(nèi)必須配備相應(yīng)的緩沖工作間用于擺放專(zhuān)用白大褂或?qū)Ｓ靡旅钡取?/span>

無(wú)菌室中的物流窗應(yīng)避免與空氣產(chǎn)生直接對(duì)流，最好不要正對(duì)著無(wú)菌室大門(mén)；空調(diào)需有可靠的多重高效過(guò)濾除菌系統(tǒng)；所有照明和紫外燈電源總開(kāi)關(guān)應(yīng)設(shè)置于無(wú)菌室門(mén)口或門(mén)外。無(wú)菌室整個(gè)布局設(shè)計(jì)應(yīng)按照人、物分離原則，防止交叉污染。

此外，在人員通道可配備高效風(fēng)淋室以減少實(shí)驗(yàn)人員帶入的污染。對(duì)無(wú)菌室和其內(nèi)部的超凈工作臺(tái)、生物安全柜都必須進(jìn)行定期監(jiān)測(cè)和日常維護(hù)，并有監(jiān)測(cè)和維護(hù)記錄。日常維護(hù)主要包括紫外線(xiàn)燈擦拭、濾網(wǎng)擦洗更換、空氣消毒及全面清潔衛(wèi)生等川。

無(wú)菌室的建材使用控制

用于無(wú)菌室建設(shè)的所有材料均應(yīng)符合消防和環(huán)保要求，具有耐腐蝕和易清潔的特點(diǎn)。無(wú)菌室的內(nèi)部裝修應(yīng)整齊、光滑、避免凹凸、所有角落最好設(shè)置為球弧體狀以避免灰塵長(zhǎng)期堆積難以清掃和消毒。

無(wú)菌室的各個(gè)通道進(jìn)出口應(yīng)采用門(mén)縫緊密且打開(kāi)后能自動(dòng)閉合的推拉式門(mén)，墻壁及吊頂應(yīng)采用隔熱防火、耐化學(xué)腐蝕、耐水分滲透、隔音且易清潔的新型建材以防止塵垢堆積、材料脫落、滋生霉菌、不易清潔等情況的發(fā)生。

總體上，無(wú)菌室應(yīng)盡量設(shè)計(jì)成完全封閉的模式，一般僅靠高效過(guò)濾系統(tǒng)與外界進(jìn)行空氣交換。當(dāng)前空氣潔凈技術(shù)已經(jīng)發(fā)展得比較成熟，在很多學(xué)科領(lǐng)域都得到了廣泛的應(yīng)用，目前很多食品微生物檢測(cè)用的無(wú)菌室也都已采用比較先進(jìn)和方便易用的的層流凈化系統(tǒng)裝置，基本上都能保證食品微生物學(xué)檢驗(yàn)過(guò)程中無(wú)菌狀態(tài)、恒溫恒濕、穩(wěn)定風(fēng)速風(fēng)量和空氣潔凈度的要求。

無(wú)菌室環(huán)境及凈化控制

無(wú)菌室無(wú)菌環(huán)境的質(zhì)量控制是微生物檢驗(yàn)獲得準(zhǔn)確數(shù)據(jù)極為重要的環(huán)節(jié)。食品微生物學(xué)檢驗(yàn)對(duì)無(wú)菌的環(huán)境和無(wú)菌操作的要求非常嚴(yán)格，整個(gè)檢測(cè)過(guò)程始終要求在無(wú)菌狀態(tài)下以無(wú)菌操作方式進(jìn)行，所以對(duì)無(wú)菌狀態(tài)的質(zhì)量控制是微生物檢驗(yàn)結(jié)果準(zhǔn)確可靠的保證。

操作人員要嚴(yán)格定期對(duì)無(wú)菌室消毒效果進(jìn)行評(píng)價(jià)，同時(shí)要制定合理的環(huán)境監(jiān)測(cè)程序，對(duì)環(huán)境監(jiān)測(cè)結(jié)果進(jìn)行數(shù)據(jù)分析，嚴(yán)格按照相應(yīng)國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)設(shè)定的不同工作區(qū)域可接受的菌落數(shù)量，對(duì)出現(xiàn)超標(biāo)情況的處理要進(jìn)行文件化控制。

此外，無(wú)菌室內(nèi)的環(huán)境情況例如溫度和濕度等可能會(huì)影響無(wú)菌室內(nèi)的消毒滅菌效果，通常情況下溫度應(yīng)控制在22℃左右，相對(duì)濕度不超過(guò)65％會(huì)比較適宜。

整個(gè)無(wú)菌室應(yīng)采用先進(jìn)高效層流空氣凈化系統(tǒng)以保證恒溫、恒濕、換氣量和空氣潔凈度的相關(guān)要求?？諝鈨艋到y(tǒng)中的高效過(guò)濾膜能對(duì)空氣中不同大小規(guī)格的塵埃粒子進(jìn)行有效過(guò)濾，防止附著在塵埃粒子上的微生物污染無(wú)菌室；采用從頂部送風(fēng)、下側(cè)回風(fēng)的氣流組織方式既保證了潔凈度，又節(jié)約了能源。

在無(wú)菌室、人員通道及物流窗內(nèi)安裝紫外殺菌燈能對(duì)物體表面和空氣進(jìn)行消毒；工作時(shí)風(fēng)淋室內(nèi)的高效過(guò)濾空氣能吹去附著在操作者工作服上的部分塵埃，物流窗可傳遞實(shí)驗(yàn)用品和樣品，這些設(shè)計(jì)都能保證無(wú)菌室的潔凈要求。

同時(shí)高效空氣過(guò)濾系統(tǒng)通風(fēng)量能滿(mǎn)足人員的需要，較好解決傳統(tǒng)無(wú)菌室不能置換新鮮潔凈空氣、工作環(huán)境差等問(wèn)題。

此外，應(yīng)定期對(duì)無(wú)菌室的無(wú)菌程度進(jìn)行監(jiān)測(cè)，可參考醫(yī)藥工業(yè)潔凈室相關(guān)標(biāo)準(zhǔn)對(duì)于塵埃粒子、沉降菌、浮游菌等項(xiàng)目的限量對(duì)食品微生物無(wú)菌室進(jìn)行定期測(cè)試。

沉降菌法有最簡(jiǎn)單、最直觀(guān)，也最能真實(shí)地反映物體表面(特別是控制部位)自然污染程度的特點(diǎn)，故也可采用平板計(jì)數(shù)瓊脂和孟加拉紅瓊脂平板各3塊，等距離置于無(wú)菌室工作位置的一條對(duì)角線(xiàn)上，開(kāi)蓋暴露15min，分別在36℃培養(yǎng)48h，28℃培養(yǎng)5d后計(jì)數(shù)沉降的細(xì)菌和霉菌及酵母的菌落數(shù)，若平均菌落數(shù)超過(guò)3CFU/皿，則應(yīng)當(dāng)對(duì)無(wú)菌室空氣和無(wú)菌室內(nèi)的物體表面進(jìn)行消毒以改善其無(wú)菌環(huán)境。

同時(shí)微生物無(wú)菌室應(yīng)制定切實(shí)有效的各項(xiàng)生物安全制度并嚴(yán)格執(zhí)行，例如在進(jìn)入放置有生物安全柜的致病菌操作間大門(mén)要裝透明的可視玻璃，大門(mén)上要貼上相應(yīng)安全等級(jí)的“生物危害”圖標(biāo)，并清晰附上緊急情況聯(lián)絡(luò)人的聯(lián)系方式。

在不同區(qū)域放置可自動(dòng)關(guān)閉的專(zhuān)用垃圾桶，在裝紫外燈的區(qū)域如物流窗外要貼上相應(yīng)的“內(nèi)有紫外殺菌燈”等警示標(biāo)識(shí)。

無(wú)菌室內(nèi)人員操作規(guī)范化控制

在無(wú)菌室內(nèi)進(jìn)行食品檢驗(yàn)前應(yīng)保證其無(wú)菌狀態(tài)，先打開(kāi)空氣凈化系統(tǒng)和紫外燈，至少保證紫外燈對(duì)空氣和無(wú)菌室內(nèi)物體表面殺菌30min。

由于紫外線(xiàn)殺菌不會(huì)產(chǎn)生二次污染，因此，此方法優(yōu)于化學(xué)殺菌，保證了室內(nèi)人員及設(shè)備的安全。進(jìn)入無(wú)菌區(qū)應(yīng)洗手、更衣、換鞋。戴帽子和口罩，以保證無(wú)菌物品存放區(qū)的空氣潔凈度。

無(wú)菌室一般僅限實(shí)驗(yàn)操作人員進(jìn)入，協(xié)助人員可在物流窗以外進(jìn)行觀(guān)察或協(xié)助，實(shí)驗(yàn)操作進(jìn)行時(shí)人員不得頻繁進(jìn)出，要嚴(yán)格保證風(fēng)淋設(shè)備的運(yùn)行和各扇門(mén)的關(guān)閉狀態(tài)。

檢驗(yàn)人員首先要嚴(yán)格保證自身的凈化，在進(jìn)入無(wú)菌室前先用洗手液洗手后進(jìn)入緩沖間換專(zhuān)用鞋和白大褂，在風(fēng)淋室風(fēng)淋后進(jìn)入無(wú)菌室。

開(kāi)始檢驗(yàn)時(shí)用75％酒精對(duì)雙手進(jìn)行擦拭消毒。操作人員進(jìn)入無(wú)菌室操作，動(dòng)作要輕，幅度要小，盡量避免不必要的走動(dòng)；檢驗(yàn)時(shí)要盡量避免頻繁談話(huà)，盡量縮短無(wú)菌檢驗(yàn)樣品在空氣中的暴露時(shí)間；

應(yīng)通過(guò)物流窗傳遞實(shí)驗(yàn)物品，人員進(jìn)出要隨手關(guān)門(mén)；應(yīng)最大限度縮短在無(wú)菌室內(nèi)的操作時(shí)間，能在無(wú)菌室外進(jìn)行的準(zhǔn)備工作，應(yīng)杜絕在無(wú)菌室內(nèi)進(jìn)行；要嚴(yán)格保證無(wú)菌室的清潔度，檢驗(yàn)完畢可用棉花蘸取75％酒精擦拭工作臺(tái)面，人員最后離開(kāi)無(wú)菌室后再打開(kāi)無(wú)菌室和超凈工作臺(tái)內(nèi)的紫外燈照射30min后關(guān)閉。

無(wú)菌物品的使用和保存控制

無(wú)菌是指在環(huán)境中一切有生命活動(dòng)的微生物的營(yíng)養(yǎng)細(xì)胞及其芽孢或孢子都不存在的狀態(tài)。

要保證食品微生物指標(biāo)檢驗(yàn)的準(zhǔn)確性，就必須做到環(huán)境無(wú)菌、儀器無(wú)菌、培養(yǎng)基無(wú)菌、人員無(wú)菌、操作無(wú)菌這5個(gè)無(wú)菌。一般要求微生物液體培養(yǎng)基要進(jìn)行高壓蒸汽滅菌，培養(yǎng)皿和吸管等物品應(yīng)該用報(bào)紙包嚴(yán)實(shí)進(jìn)行170℃干熱滅菌2h。

干熱滅菌后的物品應(yīng)放置于烘箱內(nèi)或無(wú)菌室的超凈工作臺(tái)內(nèi)，保證報(bào)紙包裝無(wú)破損并盡快使用；滅菌后的液體培養(yǎng)基若不立即使用應(yīng)置于4℃冰箱內(nèi)保存?zhèn)溆谩?/span>

無(wú)菌物品存放的有效期，受到滅菌后物品的干燥度，包裝材料、封口的嚴(yán)密性、滅菌條件和儲(chǔ)存環(huán)境等諸多因素影響。對(duì)于干熱滅菌后的無(wú)菌培養(yǎng)皿和吸管等物品，若能保證報(bào)紙無(wú)破損并能阻擋空氣中微生物滲入，其有效期一般能適當(dāng)延長(zhǎng)，至少能保存一個(gè)月的時(shí)間；對(duì)于滅菌后放置于4℃冰箱內(nèi)的液體培養(yǎng)基最好不要超過(guò)一周。

此外，保存期受到環(huán)境影響較大，對(duì)于潮濕天氣和多雨季節(jié)應(yīng)縮短其保存天數(shù)。

無(wú)菌室的日常管理監(jiān)測(cè)控制

一般在無(wú)菌室內(nèi)不要擺放太多不必要的實(shí)驗(yàn)物品以減少無(wú)菌室內(nèi)物品污染的幾率，只需要放置酒精燈、接種環(huán)、無(wú)菌剪刀和鑷子，消毒酒精等常規(guī)用品和電子天平、均質(zhì)器、水浴鍋等儀器設(shè)備，物品要?dú)w位放置，不可隨意擺放移動(dòng)。

無(wú)菌室無(wú)菌程度要定期監(jiān)控并及時(shí)進(jìn)行適當(dāng)消毒處理；紫外線(xiàn)燈管表面也要防止灰塵堆積，及時(shí)用酒精棉球擦拭，有損壞的要及時(shí)更換。有條件的檢測(cè)室可用塵埃粒子計(jì)數(shù)器定期測(cè)定工作區(qū)的潔凈度，一年左右可聯(lián)系廠(chǎng)家清理或更換高效空氣過(guò)濾器的濾芯。

此外，當(dāng)檢測(cè)人員患感冒等呼吸道疾病時(shí)應(yīng)暫時(shí)避免進(jìn)入無(wú)菌室。

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