產(chǎn)品名稱：NGS Fast Ligation Module
中文名稱：NGS 快速連接模塊
產(chǎn)品編號(hào)與包裝規(guī)格：
| 編號(hào) | 產(chǎn)品名稱 | 規(guī)格 | 產(chǎn)品介紹 | 價(jià)格 |
| HKM066A | NGS Fast Ligation Module | 24次/盒 | 預(yù)混酶模塊（NGS 快速連接） | 2745 |
產(chǎn)品描述：
NGS Fast Ligation module 是專門針對(duì)于 illumina 高通量測序平臺(tái)所優(yōu)化的預(yù)混酶模塊。使用本模塊可以將 3'端 帶有 dA 尾的 DNA 片段與 adapter 進(jìn)行快速連接。與常規(guī)方法比較，本模塊采用了一步法反應(yīng)流程，NGS DNA Fragmentation/End Repair/dA-Tailing Module 或 NGS DNA End Repair/dA-Tailing Module 反應(yīng)后所獲得的片段后 DNA，無需磁珠純化，可使用本模塊直接與 adapter 進(jìn)行連接，省去了多步磁珠純化步驟，操作更加簡便，文庫轉(zhuǎn) 化效率更高。
適用范圍：將 DNA adapter 與 3'端添加 dA 的 DNA 文庫片段的快速連接（如 NGS DNA Fragmentation Module 和 EndRepair/dA-tailing Module 處理后的產(chǎn)物）。
適用樣本量：1ng -1μg DNA。
產(chǎn)品特點(diǎn)：
1) 無需磁珠純化，可直接將 DNA adapter 與帶有 dA-Tailing 的 DNA 片段連接；
2) 連接效率高，可進(jìn)行微量樣本的 DNA adapter 連接。
注意事項(xiàng)：
1、開始實(shí)驗(yàn)前，對(duì) DNA 濃度精確定量至關(guān)重要，推薦 DNA 上樣量為 1ng-1μg。DNA可溶解于去離子水、10 mM Tris Buffer EB 或 0.1×TE 等。
2、推薦 DNA 的上樣量指的是片段化后的 dsDNA 的量。推薦 使用 Qubit、Picogreen 或者其他染料法對(duì) DNA 濃度進(jìn)行精確定 量。
3、請(qǐng)確認(rèn) DNA 溶液中不含陽離子及螯合劑，如果 DNA 溶解 于 1×TE 或不確定 DNA 溶液中的 EDTA 濃度，需先對(duì) DNA 進(jìn)行純化后再進(jìn)行片段化反應(yīng)。
保存條件：-20℃保存，盡量避免反復(fù)凍融。
NGS Fast Ligation Module 產(chǎn)品組成：
| A 包裝(24 次) | B 包裝(96 次) | |
| Adapter-ligation Enzyme | 120μl | 480μl |
| Adapter-ligation Buffer | 1ml×2 | 1ml×5 |
| RNase Free Water | 1ml | 1ml×2 |
操作步驟：
1，根據(jù)經(jīng) NGS DNA Fragmentation Module 和 End Repair/dA-Tailing Module 處理后的產(chǎn)物的量，計(jì)算使用接頭 的量并按照下表對(duì)接頭濃度進(jìn)行稀釋：
| 起始樣本量 Adapter | 稀釋倍數(shù) | 稀釋后 Adapter |
| 100ng＜X≤1μg | 不稀釋 | 10μM |
| 25ng＜X≤100ng | 稀釋 2 倍 | 5μM |
| 5ng＜X≤25ng | 稀釋 10 倍 | 1μM |
| 1ng＜X≤5ng | 稀釋 25 倍 | 0.4μM |
2，按照下表所示各組分用量配制反應(yīng)體系，并將配制完成的反應(yīng)體系輕柔混勻后置于冰上
| 名稱 | 體積 |
| dA-tailed DNA | 40μl |
| Adapter -Ligation Buffer | 50μl* |
| Adapter -Ligation Enzyme | 5μl |
| DNA Adapter | 5μl** |
| Total volume | 100μl |
注：* Adapter -Ligation Buffer 長時(shí)間放置會(huì)有白色沉淀，用前請(qǐng)上下顛倒、振蕩，使液體中白色沉淀充分溶 解并瞬時(shí)離心后使用。
**本公司接頭濃度為 10μM，請(qǐng)根據(jù)片段化 dsDNA 量對(duì)接頭進(jìn)行稀釋，加水補(bǔ)齊，使接頭體積為 5μl。
3，將此配制好的 100μl連接反應(yīng)液輕柔吸打混勻，置于 PCR 儀中，反應(yīng)程序如下：
| 溫度 | 時(shí)間 |
| 熱蓋 105℃ | off |
| 16℃ | 15min |
| 4℃ | Hold |
注：當(dāng)片段化 dsDNA 量較低，實(shí)驗(yàn)效果不理想時(shí)，可嘗試將連接時(shí)間延長一倍。
4，連接產(chǎn)物磁珠純化（Post Ligation Clean Up） 該步驟使用磁珠對(duì)連接產(chǎn)物進(jìn)行純化或分選。純化可除去未連 接的 Adapter 或 Adapter Dimer 等無效產(chǎn)物。
