產(chǎn)品名稱：大腸埃希氏菌志賀毒素核酸檢測(cè)試劑盒（PCR-熒光探針法）
英文名稱：Multiplex PCR Detection Kit for Shiga toxin-producing E.coli (Fluorescent Probe Assays)
產(chǎn)品編號(hào)與包裝規(guī)格：
| 編號(hào) | 規(guī)格 |
| FZ017BF2 | 48 測(cè)試/盒 |
產(chǎn)品簡(jiǎn)介：本試劑盒僅適用于食品中致病性大腸埃希氏菌（STEC）產(chǎn)志賀毒素類型的定性檢測(cè)。
檢測(cè)原理：基于Real Time PCR技術(shù)，利用針對(duì)腸桿菌科的16S rRNA基因和STEC的志賀毒素基因stx1、stx2的引物組、熒光探針以及其他反應(yīng)優(yōu)化配置所需試劑，加入待檢樣品核酸即可進(jìn)行擴(kuò)增反應(yīng)。在擴(kuò)增過(guò)程中，熒光探針與目的基因片段結(jié)合，可被Taq酶分解并產(chǎn)生熒光信號(hào)，此時(shí)熒光定量PCR儀可識(shí)別該熒光信號(hào)，同時(shí)根據(jù)其強(qiáng)弱變化繪制出相應(yīng)的實(shí)時(shí)擴(kuò)增曲線，進(jìn)而判定致病性大腸埃希氏菌（STEC）產(chǎn)志賀毒素的類型。
stx1、stx2、16S rRNA基因分別對(duì)應(yīng)熒光報(bào)告基團(tuán)HEX、FAM、Cy5。
大腸埃希氏菌志賀毒素核酸檢測(cè)試劑盒(PCR-熒光探針法)產(chǎn)品組分：
儲(chǔ)存條件與保質(zhì)期：-20℃儲(chǔ)存，有效期為12個(gè)月，避免反復(fù)凍融。
靈敏度：最低檢驗(yàn)限達(dá)到 100 CFU/Test
所需其他材料和適用儀器：熒光定量PCR儀（具有能夠檢測(cè)HEX、FAM、Cy5標(biāo)記的熒光通道）、高速離心機(jī)、移液器、移液槍頭及離心管等。
大腸埃希氏菌志賀毒素核酸檢測(cè)試劑盒(PCR-熒光探針法)使用指南：
1，樣品前處理
1) 參照 GB 4789.6?2016，使用 1 μL 接種環(huán)刮取營(yíng)養(yǎng)瓊脂平板或斜面上培養(yǎng) 18 h~24 h 的待鑒定的可疑菌落，懸浮到含 30 μL 裂解液的無(wú)菌離心管中，充分懸浮菌體，輕彈管壁消除氣泡，99℃加熱 10 min；
2) 12000 r/min 離心 15 min，上清即為粗提的DNA，可轉(zhuǎn)移至 0.2 mL 無(wú)菌離心管中，在-20℃下可長(zhǎng)期保存。也可以選擇商業(yè)化的細(xì)菌基因組提取試劑盒進(jìn)行提?。?/p>
2, 加樣、反應(yīng)
1) 按照需求取n個(gè)PCR反應(yīng)管（n=1管陰性對(duì)照+待檢測(cè)樣品數(shù)+1管陽(yáng)性對(duì)照），從試劑盒中取出預(yù)混液，充分融化，渦旋后短暫離心，以上每管加入20 μL預(yù)混液，待用。
2) 向上述n個(gè)反應(yīng)管中分別加入陰性對(duì)照、待測(cè)樣品DNA、陽(yáng)性對(duì)照各5 μL，總反應(yīng)體積為25 μL。蓋緊管蓋，短暫離心，立即進(jìn)行PCR擴(kuò)增反應(yīng)。
3) PCR反應(yīng)體系為25 μL，取HEX、FAM、Cy5檢測(cè)通道，在反應(yīng)階段2中60℃時(shí)收集熒光信號(hào)，具體程序如下：
| 反應(yīng)階段 | 溫度 | 時(shí)間 | 信號(hào)收集 | 循環(huán)數(shù) |
| 1 | 95°C | 30 sec | 1 | |
| 2 | 95°C | 5 sec | } 40 | |
| 60°C | 30 sec | ? |
3, 結(jié)果：一般情況下，可通過(guò)軟件自動(dòng)設(shè)定的基線、閾值等直接讀取檢測(cè)結(jié)果。如需調(diào)整，可根據(jù)所使用儀器的自身情況（如噪聲等）以及選取的不同熒光通道進(jìn)行調(diào)整。
1) 質(zhì)量控制：陰性對(duì)照未出現(xiàn)明顯的S型擴(kuò)增曲線或Ct值＞37，陽(yáng)性對(duì)照出現(xiàn)S型擴(kuò)增曲線且其Ct值＜30。若陰陽(yáng)性對(duì)照不同時(shí)滿足上述條件，則本次檢測(cè)結(jié)果無(wú)效，應(yīng)重新檢測(cè)或與產(chǎn)品技術(shù)支持聯(lián)系。
2) 結(jié)果判讀：（根據(jù)反應(yīng)所得Ct值判讀，具體見下表：）
| Ct值 | 每個(gè)基因判讀結(jié)果 |
| ≤35 | 對(duì)應(yīng)的基因陽(yáng)性。 |
| 35~37 | 建議重新檢測(cè)，若復(fù)測(cè)結(jié)果Ct≥37，則對(duì)應(yīng)的基因陰性，反之為陽(yáng)性。 |
| ≥37 | 對(duì)應(yīng)的基因陰性。 |
| 基因檢出情況 | 最終判讀結(jié)果 |
| 16S rRNA(+/-)、stx1(-)、stx2(-) | 非STEC |
| 16S rRNA(+)、stx1(+)、stx2(-) | STEC，志賀毒素為stx1 |
| 16S rRNA(+)、stx1(-)、stx2(+) | STEC，志賀毒素為stx2 |
| 16S rRNA(+)、stx1(+)、stx2(+) | STEC，志賀毒素為stx1&stx2 |
更多實(shí)時(shí)熒光PCR檢測(cè)試劑盒(食源性致病菌檢測(cè)系列) 產(chǎn)品列表：
| 貨號(hào) | 產(chǎn)品名稱 | 用途 |
| FZ001BF2 | 銅綠假單胞菌核酸檢測(cè)試劑盒(PCR-熒光探針法) | 包裝飲用水等水體中銅綠假單胞菌的定性檢測(cè) |
| FZ002BF2 | 糞鏈球菌核酸檢測(cè)試劑盒(PCR-熒光探針法) | 包裝飲用水等水體中糞鏈球菌(EF)的定性檢測(cè) |
| FZ003BF2 | 產(chǎn)氣莢膜梭菌核酸檢測(cè)試劑盒(PCR-熒光探針法) | 用于食品和水體中產(chǎn)氣莢膜梭菌的定性檢測(cè) |
| FZ004BF2 | 金黃色葡萄球菌核酸檢測(cè)試劑盒(PCR-熒光探針法) | 用于食品樣本或可疑菌落中金黃色葡萄球菌的檢測(cè) |
| FZ005BF2 | 沙門氏菌核酸檢測(cè)試劑盒(PCR-熒光探針法) | 用于食品中沙門氏菌的檢測(cè) |
| FZ006BF2 | 志賀氏菌核酸檢測(cè)試劑盒(PCR-熒光探針法) | 用于食品中志賀氏菌的定性檢測(cè) |
| FZ007BF2 | 單增李斯特氏菌核酸檢測(cè)試劑盒(PCR-熒光探針法) | 用于食品中單增李斯特氏菌的檢測(cè) |
| FZ008BF2 | 副溶血性弧菌核酸檢測(cè)試劑盒(PCR-熒光探針法) | 用于食品中副溶血性弧菌的定性檢測(cè) |
| FZ009BF2 | 大腸埃希氏菌O157:H7核酸檢測(cè)試劑盒(PCR-熒光探針法) | 用于食品中大腸埃希氏菌O157:H7 的檢測(cè) |
| FZ010BF2 | 阪崎腸桿菌核酸檢測(cè)試劑盒(PCR-熒光探針法) | 用于食品中阪崎克羅諾桿菌的檢測(cè) |
| FZ011BF2 | 小腸結(jié)腸炎耶爾森氏菌核酸檢測(cè)試劑盒(PCR-熒光探針法) | 用于食品中小腸結(jié)腸炎耶爾森氏菌的檢測(cè) |
| FZ012BF2 | 布魯氏菌核酸檢測(cè)試劑盒(PCR-熒光探針法) | 用于食品中布魯氏菌的檢測(cè) |
| FZ013BF2 | 溶藻弧菌核酸檢測(cè)試劑盒(PCR-熒光探針法) | 用于食品、水產(chǎn)樣本中溶藻弧菌的檢測(cè) |
| FZ014BF2 | 創(chuàng)傷弧菌核酸檢測(cè)試劑盒(PCR-熒光探針法) | 用于食品中創(chuàng)傷弧菌的檢測(cè) |
| FZ015BF2 | 嗜肺軍團(tuán)菌核酸檢測(cè)試劑盒(PCR-熒光探針法) | 用于飲用水、非飲用水、公共場(chǎng)所環(huán)境樣本中嗜肺軍團(tuán)菌的檢測(cè) |
| FZ016BF2 | 唐菖蒲伯克霍爾德氏菌核酸檢測(cè)試劑盒(PCR-熒光探針法) | 于食品中唐菖蒲伯克霍爾德氏菌的定性檢測(cè) |
