產(chǎn)品名稱：NLS-Cas9-EGFP Nuclease
中文名稱：NLS-Cas9-EGFP 核酸酶
產(chǎn)品編號與包裝規(guī)格：
| 編號 | 產(chǎn)品名稱 | 規(guī)格 | 產(chǎn)品介紹 | 價格 |
| HKE379-01A | NLS-Cas9-EGFP Nuclease | 50μg/盒 | crispr基因編輯（核酸酶） | 1575 |
產(chǎn)品描述：
CRISPR/Cas9 是細菌和古細菌在長期演化過程中形成的一種適應性免疫防御系統(tǒng)。Cas9 核酸酶是一種 RNA 引導的內(nèi)切酶，能催化雙鏈 DNA 的斷裂,這種靶向核酸酶是高精度基因組編輯的有力工具。本制品在蛋白兩端分別加了核定位信號（NLS），在 C 端加了 EGFP 序列。
Cas9 蛋白與 Crispr/Cas9 系統(tǒng)的導向 RNA（sgRNA）組成一個高度穩(wěn)定的核糖核蛋白（RNP）復合物。當 Cas9 帶有 NLS 表達序列時,Cas9-RNP 復合體可以在進入細胞后立即定位到細胞核，無需體內(nèi)轉錄或翻譯。此外，與其他系統(tǒng)相比，Cas9-RNP 復合物從細胞中迅速清除，最大限度地減少了脫靶效應。EGFP 通過熒光激活細胞排序（FACS），使細胞群富集以進行所需的基因組編輯，顯著降低了在基因組編輯應用中單細胞克隆和基因分型的人工和成本。
產(chǎn)品特點：純蛋白體系，避免 CRISPR 基因敲除時引入質(zhì)粒或病毒干擾；蛋白帶有 EGFP 標記，更易進行轉染效率判斷和細胞富集；可顯著降低脫靶效應。
產(chǎn)品用途：
1，基于蛋白與 sgRNA 轉染的非病毒載體 CRISPR 基因敲除；
2，基于蛋白與 sgRNA 轉染的非病毒載體 CRISPR 基因敲入；
3，sgRNA 剪切靶點 DNA 效率檢測，降低體內(nèi)篩選成本；
4，體外剪切靶 DNA 的特異位點。
應用實例：圖例）Cas9 Nuclease 做 DNA 片段切割活性檢測：
帶有靶位點的 DNA 片段為 1500bp，酶切后的片段為 1100bp 和 400bp。
保存溫度：-20℃保存，或-80℃長期保存。
NLS-Cas9-EGFP Nuclease 產(chǎn)品包裝（A包裝）：
| 產(chǎn)品組成 | 體積 |
| NLS-Cas9-EGFP Nuclease(1μg/μl) | 50 μL |
| 10× Cas9 Reaction Buffer | 500μl |
| *HKE379-02 系列為 5μg/μl 濃度，共 10μl | |
質(zhì)量保證：經(jīng)多次柱純化，SDS-PAGE 膠檢測僅可見清 晰單一的目的條帶，純度達 95%，內(nèi)毒素含量<100EU/mg，qPCR 方法檢測無大腸桿菌基因組殘 留，無 RNase、核酸內(nèi)、外切酶污染。
體外切割體系（20μL）：
| dsDNA | 200 ng |
| sgRNA | 200 ng |
| NLS-Cas9-EGFP Nuclease | 0.5-1.5 ug |
| 10× Cas9 Reaction Buffer | 2 μl |
| RNase Free Water | To 20 μl |
37 ℃保溫 1 h、70℃保溫 10 min
注：在反應體系中可添加 RNase Inhibitor 至 1U/μl，防止RNase 污染。
相關產(chǎn)品：
| HKE365 | NLS-Cas9 Nuclease |
| HKE366* | Cas9（D10A）Nickase |
| HKE367** | Cas9（H840A）Nickase |
| HKE368*** | Cas9(D10A,H840A) Nuclease |
| HKE369 | sgRNA In Vitro one-step Transcription Kit |
| HKE370 | sgRNA Screening and Genotype Confirmation Kit |
* 為 Cas9(D10A) Nickase，能在與 sgRNA 靶序列互補的 DNA 鏈上產(chǎn)生切口，從而形成功能性的單鏈斷裂，可以減少意外的脫靶基因修飾。
** 為 Cas9(H840A) Nickase，能在 sgRNA 靶序列所在的DNA 鏈上產(chǎn)生切口，從而形成功能性的單鏈斷裂，可以減少意外的脫靶基因修飾。
***為 Cas9(D10A,H840A) Nuclease，具有靶 DNA 結合 活性， 但無切割活性，可用于陰性對照等用途。
