產(chǎn)品名稱：Bst DNA Polymerase, Large Fragment(with dNTP)
中文名稱：Bst DNA聚合酶，大片段(with dNTP)
產(chǎn)品編號(hào)與包裝規(guī)格：
| 編號(hào) | 產(chǎn)品名稱 | 規(guī)格 | 產(chǎn)品介紹 | 產(chǎn)品價(jià)格 |
| HKE015-01A | Bst DNA Polymerase, Large Fragment(with dNTP) | 800U | Bst DNA聚合酶，大片段 |
產(chǎn)品描述：Bst DNA聚合酶大片段是Bacillus stearothermophilus DNA聚合酶的一部分，來(lái)源于E.coli菌株。利用基因重組技術(shù)，在大腸桿菌中進(jìn)行表達(dá)后經(jīng)多次純化分離而得。該酶具有5′→3′DNA聚合酶活性， 但不具有5′→3′外切核酸酶活性。本制品可應(yīng)用于DNA測(cè)序、DNA 標(biāo)記和等溫DNA擴(kuò)增等。
產(chǎn)品特點(diǎn)：
鏈置換活性強(qiáng)。
高靈敏度。
最佳活性溫度為 65℃，恒溫?cái)U(kuò)增，無(wú)需熱循環(huán)儀。
產(chǎn)品用途：
1）富含 GC 序列的 DNA 序列測(cè)定；
2）微量（納克量）DNA 模板的快速測(cè)序；
3）隨機(jī)引物 DNA 標(biāo)記；
4）雙鏈 DNA 5'突出端補(bǔ)平法標(biāo)記；
5）可用于等溫 DNA 擴(kuò)增，如環(huán)介導(dǎo)等溫?cái)U(kuò)增（LAMP），全基因組擴(kuò)增（WGA），解旋酶恒溫基因擴(kuò)增（HDA）等。
應(yīng)用實(shí)例：圖例）Bst DNA 聚合酶大片段用于LAMP 實(shí)驗(yàn)，以 M13 ssDNA 為模板， 以 F3/B3，F(xiàn)IP/BIP 為引物，65℃反應(yīng)1 小時(shí)后，進(jìn)行瓊脂糖凝膠電泳檢測(cè)。
泳道M：1kb DNA Ladder ；
泳道 1：LAMP 擴(kuò)增產(chǎn)物。
反應(yīng)體系（25μL）如下：
| 10×Bst LF Buffer | 2.5μL |
| F3/B3 | 0.2μM（終濃度） |
| FIP/BIP | 0.8μM（終濃度） |
| 甜菜堿 | 1M（終濃度） |
| dNTPs | 400μM（終濃度） |
| M13 ssDNA 模板 | 2μL |
| Bst DNA 聚合酶Large Fragment | 1μL（8U） |
| ddH2O | 至 25μL |
保存溫度：-20℃。
產(chǎn)品包裝（A 包裝）：
質(zhì)量保證：經(jīng)多次柱純化，SDS-PAGE 膠檢測(cè)僅可見(jiàn)清晰單一的目的條帶，qPCR 方法檢測(cè)無(wú)大腸桿菌 DNA 殘留，無(wú)核酸內(nèi)、外切酶污染。
活性定義：65℃條件下，30分鐘內(nèi)使10nmol的dNTPs摻入酸不溶性沉淀物所需要的酶量定義為1個(gè)活性單位。
10×反應(yīng)緩沖液：200mM Tris-HCl，100mM (NH4)2SO4，500mM KCl，20mM MgSO4，1% Tween 20，pH8.8。
保存體系：50 mM KCl，10 mM Tris-HCl (pH 7.5)，1mM DTT, 0.1 mM EDTA，0.1% Triton X-100 和 50% Glycerol。
反應(yīng)條件：1×反應(yīng)緩沖液，65℃溫浴。
熱失活：80℃，10 分鐘。
注意事項(xiàng)：
1）Bst DNA 聚合酶不具有 3′→5′外切酶活性；
2）長(zhǎng)期貯存需加入 100μg/mL BSA 或 0.1% Triton X-100；
3）建議反應(yīng)溫度不要超過(guò) 70℃；
4）Bst DNA 聚合酶不能用于熱循環(huán)測(cè)序或PCR。
